【摘要】一種品茗用之茶壺，系由一密閉凹陷之壺座、一 擱置在壺座上方而壺嘴設在底部之壺體及一覆蓋在 壺體上而蓋鈕具有一氣孔的壺蓋組成。壺座與壺體 間及壺體與壺蓋間均可藉相互配合之凹凸部及溫壺 時滲入凹凸部間之開水形成良好密封，并在壺體與壺 座
【摘要】 本發明涉及克隆有人腫瘤壞死因子-α基因的變 鉛青鏈霉菌的構建方法。本發明方法采用基因工程 技術，以質粒PIJ486為載體，其中包括通過T4-DNA 連接酶將分別用EcoRI-HindIII雙酶切得到的質粒 PHTITNFcDNA片段和質粒PIJ486片段進行連接，通 過轉化使其克隆至變鉛青鏈霉菌TK54，挑選轉化 子，提取重組質粒，得到No7轉化子，獲得了克隆有 人腫瘤壞死因子-α基因的變鉛青鏈霉菌TK54-HT (含有重組質粒PIJT7)，將該克隆菌株進行發醇培養， 即可獲得腫瘤壞死因子蛋白，其表達水平可達1×107 單位/升以上，菌種遺傳性穩定。 【專利類型】發明申請 【申請人】中國醫學科學院醫藥生物技術研究所 【申請人類型】科研單位 【申請人地址】100050北京市天壇西里1號 【申請人地區】中國 【申請人城市】北京市 【申請人區縣】東城區 【申請號】CN91103105.7 【申請日】1991-05-17 【申請年份】1991 【公開公告號】CN1055200A 【公開公告日】1991-10-09 【公開公告年份】1991 【授權公告號】CN1037009C 【授權公告日】1998-01-14 【授權公告年份】1998.0 【IPC分類號】C12N15/09; C12P21/02; C12N15/64 【發明人】李元; 劉菊萍; 李煥婁; 石蓮英; 劉伯英 【主權項內容】1、克隆有人腫瘤壞死因子-α(TNF)基因的變鉛青鏈霉菌的構建方法，其中包括酶切、連接、轉化、挑選轉化子提取重組質粒和經確證后得到所需菌種五個步驟，其特征在于： a、連接：以質粒PIJ486為載體，將經過限制性內切酶EcoRI-HindⅢ雙酶切得到的質粒PHT1TNFcDNA片段和經過限制性內酶EcoRI-HindⅢ雙酶切得到的質粒PIJ486片段相連接，cDNA片段濃度和載體DNA濃度比為3～5∶1，加入T4DNA連接酶，于10～14℃放置3小時以上進行連接，獲得重組DNA分子； b、轉化：采用上述a步驟中連接后的重組DNA，以變鉛青鏈霉菌TK54的原生質體為受體，按照Hopwood等人的方法，將連接后的DNA轉化至所說的受體菌中； c、挑選轉化子及提取重組質粒：以含新霉素30μg/ml的R2瓊脂平板挑選含重組質粒的轉化子，凡是挑選出來的耐藥菌落多為含重組質粒的轉化子，采用Katz的快速堿變性方法提取含重組質粒的轉化子，將瓊脂糖凝膠電泳后確定為重組質粒的樣品再用EcoRI-HindⅢ酶切后的DNA片段與在同一瓊脂糖凝膠電泳平板上泳動的入噬菌體DNA限制性內切酶HindⅢ酶切片段的距離進行比較從而確定各片段分子量大小，其中№7轉化子所含重組質粒PIJT7插入片段為615bp與TNFcDNA相同，經L929細胞毒實驗、中和實驗和SDS-聚丙酰胺凝膠電泳確證：№7轉化子為人腫瘤壞死因子-α的基因工程菌。 【當前權利人】中國醫學科學院醫藥生物技術研究所 【當前專利權人地址】北京市天壇西里1號 【統一社會信用代碼】12100000400819808G
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